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虎betway必威88app菌种的生产技术
发布者: 发布时间:2015/3/14 阅读:896

江国志
一、母种的培养
母种的培育是制种工作中的关键,它的优劣直接影响到原种、栽培种的质量好坏。母种可以由孢子萌发而成,也可以从子实体组织分离或用虎betway必威88app斜面的菌丝体移接扩大转管制作。
1、培养基:虎betway必威88app母种分离和菌种保存宜用普通培养基(PDA)。虎betway必威88app菌丝在此培养基上生长速度较慢。PDA配方和制作方法是:将马铃薯200克去皮切成蚕豆大小的块加1000毫升蒸馏水,用文火煮沸20-30分钟过滤取汁,加葡萄糖20克,琼脂15克,置于铝锅中加热,待琼脂充分溶化后搅匀,定容至1000毫升,趁热分装于试管中,每管装约12毫升,1000毫升可分装80---100支试管。分装时要用长管漏斗,不要使培养基沾到试管口上,以免沾湿棉塞污染杂菌。塞棉塞要用普通棉花,塞入试管要松紧合适。然后,每10支试管用皮套捆成一小捆,每5小捆再捆成一大捆,棉塞用牛皮纸包好灭菌。取出试管倾斜排放在桌面上,试管斜面长度应为管长的2/3,冷却凝固后,取一些试管放入恒温箱中27--30度空白培养10天,经无菌观察,确认无杂菌,才能大量用于分离制种或转接生产母种。
2、接种:用无菌操作从虎betway必威88app子实体组织中分离黄豆粒大小的一块,接入PDA培养基的试管斜面上,置恒温箱或培养室(25℃±2℃)培育,3天后菌丝生长洁白、健壮,7天后菌丝长满斜面。接种要在严格的无菌条件下进行。如果没有出现杂菌,分离培养就算成功。但该菌株是否优良,生产价值如何,还需出菇栽培试验。
二、原种的制备:
由试管母种初步扩大繁殖到固体种(原种)。由原种再扩大繁殖应用于生产,叫生产种或栽培种。母种菌丝数量太少,在实际生产中必须把一级种扩大繁殖成二级种(即原种)才能满足生产种的需要。好的原种菌丝密集、洁白、长势均匀、粗壮、呈棉毛状,有爬壁现象。原种长满瓶之后,应立即扩大为栽培种,否则一旦营养耗尽,菌丝就会衰老甚至死亡。
原种的制作过程是:拌料(含水量60%左右)、装瓶、压实、打洞、洗瓶、用塑料膜包扎瓶口、灭菌、冷却、接种、培养。
1、培养基配方:棉籽壳97克,石膏粉1千克,石灰2千克,水约60千克。
2、拌料:含水量约60%。将棉籽壳、石膏粉、充分拌匀,将石灰溶解在水中,然后边拌边加石灰水,石灰水加完后再充分拌匀。
3、装瓶:将配制好的培养料装入培养瓶中,装料时尽量做到四周紧实,中间松,并在中心打一小洞,以利接种。
4、洗瓶,加塑料膜包扎:将装好料的瓶子,用清洁湿巾把瓶子的四周及瓶口擦洗干净,以免杂菌污染,用塑料膜将瓶口扎好。
5、灭菌:装瓶后应立即灭菌,不能隔日。
6、接种:将斜面母种划成5-8块,用无菌接种钩钩下一块放入原种培养基上(注意将长有菌丝的一面朝向原种培养料),使其直接与培养基接触,以利生长,置恒温箱或培养室(25℃±2℃)黑暗培育。
三、栽培种的生产
原种扩大繁殖就成栽培种。栽培种也就是直接用于大生产的生产种,又称三级种。虎betway必威88app栽培在培养料配方、制作、灭菌、接种和培养等方面与原种生产相同,其培养容器用玻璃瓶子,也有用塑料薄膜袋的。
制作栽培种时,由于数量多,往往比较粗放,培养场所不讲究。因此,播种之前也必须检查菌种有否带螨类或其它病虫害。如果发现菌种有螨或病虫害应及时杀灭及弃去不用。菌丝生活力强弱与菌龄有密切关系,它直接影响到栽培的成败。菌丝生活力减弱,播种后不容易成活或菌丝生长缓慢,时间长了菌丝没布满培养料则易感染杂菌,往往造成栽培失败。所以,控制菌龄很重要,一般接种一个月之内,菌丝生活力最强。菌种长出原基时为成熟菌种,应尽快用;原基一旦变干枯或菌丝柱收缩,瓶底出现积液时,菌种已老化,不宜再使用,应淘汰。
四、注意事项:
1、装瓶时培养料上下松紧要一致,灭菌要彻底,接种要严格无菌操作。
2、原种培育中,从第3天到菌丝覆盖培养基表面并深入基内2cm时,要勤检查,发现杂菌污染及时处理。
3、菌丝生长到培养基1/3时,室温要比初期低2-3℃,室内空气要新鲜。
4、生命力强的菌种,呈白色、富有弹性。
5、培养好的菌种要放在凉爽、干燥、清洁的避光室内保存,以防老化。如保存期过长,菌种干燥收缩过多或菌体自溶产生黄褐色的水分,表明菌种已经严重退化,生命力弱,不宜再用。
6、装瓶标准:每瓶能装干料2.5两,装完湿料连瓶称重应为1.1斤,这就证明装料量、松紧度都要适度。料中间打一个眼以利菌丝快速生长,装完瓶后马上擦净瓶身,盖上聚丙烯塑料,套好皮套,进行高压灭菌 1.5 公斤压力保持2小时以上。灭菌结束后,瓶温降到 30 度以下搬入接种箱中,接种前必须进行严格消毒。一支生产母种可转接 5--8 瓶二级种,接完后马上放入 25----27 度的恒温箱中培养,没有恒温箱也可以放在能保持 25 度条件下培养。每 3---5 天检查一次,把长势不好、不纯的及时挑出来。经 25 天左右培养,就能长满瓶,满瓶后应再巩固培养 5 天,才能转接三级种。二级种可采用12*24丙烯袋装,因为罐头瓶不好买,大规模制种都有采用塑料袋。
7、二级种制作要领:料要干,无变质,加入原料必须精确,灭菌必须达到杀死一切微生物。接种要在绝对无菌条件下进行,盖瓶塑料必须用聚丙烯塑料,因为聚丙烯塑料比玻璃还透明,就是有小米粒大小的杂菌,也能清楚地观察到。
 
 

 
 
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